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Post by tentese on Jul 30, 2023 6:17:20 GMT -5
a SULI 介导的光降解目标蛋白 (POI) 的示意图。SULI 融合蛋白在蓝光下稳定,但在黑体降解。b不同 VVD 变体在黑暗和光照条件下稳定性的变化。在通过流式细胞术分析 mCherry 荧光之前,将表达不同 mCherry-VVD 变体的酵母细胞在光照或黑暗条件的溶酶体中)或泛素-蛋白酶体途径降解34 , 35 , 36。为了研究 SULI 介导的降解机制,用蛋白酶体抑制剂 MG132 或液泡蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟 (PMSF) 处理带有erg 6突变(erg6 突变使细胞对多种抑制剂,例如 CH 亚洲手机号码列表X 和 MG132 37 )并表达 mCherry-SULI 的酵母细胞。我们发现MG132在黑暗中显着上调mCherry-SULI的细胞蛋白水平,而PMSF的影响可以忽略不计(图 4a )),表明蛋白酶体可能负责细胞中 SULI 标签的降解。值得注意的是,即使在高浓度下,MG132也不能完全挽救 源重组将LEU2营养标记替换为URA3,得到pGADH-U。具体地,通过PCR产生载体和URA3基因的DNA片段,然后与试剂(YEASEN)混合以产生新载体。从合成构建体(Generay,上海)中扩增了编码多种光敏蛋白的 DNA 片段,包括 vim、AsLOV2、ppLOV2、iLID、sLID 和
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